氣泡會對ELISA實驗結(jié)果產(chǎn)生哪些影響

   氣泡確實可能對ELISA實驗結(jié)果產(chǎn)生干擾，尤其是在液體分配和孵育階段。當(dāng)樣本或試劑中存在氣泡時，它們可能阻礙抗原抗體的有效結(jié)合，導(dǎo)致反應(yīng)不均勻或信號讀取異常。具體影響主要體現(xiàn)在以下幾個方面：

   首先，氣泡可能干擾光學(xué)信號的檢測。ELISA依賴酶標(biāo)儀對微孔板底部的吸光度進(jìn)行測量，而氣泡會散射光線，導(dǎo)致吸光度值假性升高或波動，尤其在最后顯色步驟中，微小的氣泡可能被誤 判為陽性信號。曾有研究表明，直徑超過1mm的氣泡可使OD值偏差高達(dá)15%。

   其次，在孵育過程中，氣泡占據(jù)液面空間會減少有效反應(yīng)面積。若氣泡附著在包被抗體的孔壁，會形成局部"隔離區(qū)"，阻礙樣本與固相抗體的接觸。這種情況下，即使充分混勻，氣泡覆蓋區(qū)域的反應(yīng)效率仍會顯著降低，導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)曲線線性度下降或樣本重復(fù)孔間CV值增大。

   為減少氣泡干擾，實驗操作時需注意：1）加樣槍頭應(yīng)貼壁緩慢釋放液體，避免快速沖擊產(chǎn)生氣泡；2）孵育前可短暫離心微孔板（1000rpm，1分鐘）去除氣泡；3）使用表面活性劑如Tween-20可降低液體表面張力。值得注意的是，自動化ELISA系統(tǒng)通過超聲波除泡模塊能更有效控制該問題，而手工操作時建議在讀數(shù)前用無菌針頭挑破肉眼可見的氣泡。

   質(zhì)量控制方面，建議每次實驗設(shè)置"氣泡干擾對照孔"：故意在陰性對照孔中**氣泡，觀察其對基線信號的影響程度。若發(fā)現(xiàn)氣泡導(dǎo)致OD值異常，應(yīng)重新檢測受影響樣本。通過規(guī)范操作和系統(tǒng)驗證，可將氣泡干擾控制在允許誤差范圍內(nèi)。