如何判斷ELISA檢測(cè)中的批間變異率

在ELISA檢測(cè)中，批間變異率（inter-assay variation）是評(píng)估實(shí)驗(yàn)重復(fù)性和穩(wěn)定性的重要指標(biāo)。

1. ?數(shù)據(jù)采集與計(jì)算?

?連續(xù)測(cè)定?：在相同條件下，對(duì)同一濃度質(zhì)控物進(jìn)行至少20次獨(dú)立批次的檢測(cè)。

?統(tǒng)計(jì)參數(shù)?：計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差（SD），批間變異率公式為：

批間CV%= SD×100%

                 均值

例如，若20次檢測(cè)的均值為100，SD為5，則批間CV%為5%。

2. ?可接受標(biāo)準(zhǔn)?

?與操作變異率（OCV）對(duì)比?：批間CV%應(yīng)接近或小于2倍OCV。通常ELISA的OCV需<15%，自動(dòng)化系統(tǒng)需<10%。

?臨床要求?：免疫檢測(cè)中，批間CV%一般需<15%（手工操作）或<10%（自動(dòng)化儀器）。

3. ?異常處理?

若批間CV%超標(biāo)，需排查以下問題：

?試劑穩(wěn)定性?：檢查試劑批號(hào)是否一致，儲(chǔ)存條件是否合規(guī)?。

?操作一致性?：確保加樣、孵育時(shí)間、洗滌步驟等標(biāo)準(zhǔn)化?。

?設(shè)備校準(zhǔn)?：驗(yàn)證酶標(biāo)儀或洗板機(jī)的性能是否穩(wěn)定?。

4. 數(shù)據(jù)分析方法

批間變異率通常通過變異系數(shù)（CV，Coefficient of Variation）來量化，計(jì)算公式為：

\[ CV = \frac{\text{標(biāo)準(zhǔn)差（SD）}}{\text{平均值（Mean）}} \times 100\% \]

實(shí)際操作中，需計(jì)算多批次間同一質(zhì)控樣本或標(biāo)準(zhǔn)品的CV值。例如，若連續(xù)3次檢測(cè)某樣本的OD值分別為1.2、1.5、1.3，其平均值為1.33，標(biāo)準(zhǔn)差為0.13，則CV為9.8%。通常，批間CV應(yīng)控制在15%以內(nèi)，嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)要求可能需低于10%。

5. 質(zhì)量控制與優(yōu)化

若批間變異率超出預(yù)期，需排查潛在因素：

- 試劑問題：檢查抗體效價(jià)是否下降、酶標(biāo)板是否受潮或過期。

- 操作差異：確認(rèn)孵育時(shí)間、溫度、洗板次數(shù)等是否一致。自動(dòng)化設(shè)備比人工操作更能減少誤差。

- 環(huán)境因素：實(shí)驗(yàn)室溫濕度波動(dòng)可能影響結(jié)果，需記錄環(huán)境參數(shù)并優(yōu)化條件。