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產å“å稱 |  禽傳染性支氣管炎病毒(AIBV)æ ¸é…¸æª¢æ¸¬è©¦åŠ‘ç›’ |
è¦(guÄ«)æ ¼ | 48T/ç›’ |
類別 | 熒光-PCR法 |
產å“å稱:禽傳染性支氣管炎病毒(AIBV)æ ¸é…¸æª¢æ¸¬è©¦åŠ‘ç›’
è¦(guÄ«)æ ¼ï¼š48T/ç›’
分類:熒光-PCR法
儲å˜æ¢ä»¶ï¼š-20℃é¿å…‰ä¿å˜ï¼Œé¿å…å復å‡èžã€‚
é‹è¼¸ï¼šä½Žæº«ã€é¿å…‰ï¼Œå¿«éžå…è²»é€è²¨ä¸Šé–€ã€‚
特點:
1.å³é–‹å³ç”¨ï¼Œç”¨æˆ¶åªéœ€è¦æä¾›æ¨£å“ DNA 模æ¿ï¼Œæ“作簡單,定é‡æº–確快速。
2. 引物經éŽå„ª(yÅu)化,特異性強。é 期的 PCR 產物長度為 560 bp。
3. PCR mix ä¸å«ä¸Šæ¨£æŸ“料,PCR åŽå¯ä»¥ç›´æŽ¥ä¸Šæ¨£é›»æ³³ã€‚
4. æ供陽性å°ç…§ï¼Œä¾¿äºŽåˆ†æžè©¦é©—çµæžœã€‚注æ„äº‹é …ï¼š
1.基礎程åºï¼›
2.擴增溫度和延伸溫度;
3.å應時間;
4.循環(huán)次數(shù);
5.PCR å應液的é…制;
6.PCR技術的基本原ç†ï¼›
7.PCRçš„å應動力å¸ï¼›
8.PCR擴增產物;
9.PCRå應體系與å應æ¢ä»¶ã€‚

使用åŠæ•ˆæžœï¼š
PCRå應特點
(1) 特異性強
PCRåæ‡‰çš„ç‰¹ç•°æ€§æ±ºå®šå› ç´ ç‚ºï¼š
   ①引物與模æ¿DNA特異æ£ç¢ºçš„çµåˆï¼›
ã€€ã€€ã€€â‘¡å ¿åŸºé…å°åŽŸå‰‡ï¼›
  ?ã€è·¿aq DNAèšåˆé…¶åˆæˆåæ‡‰çš„å¿ å¯¦æ€§ï¼›
  ?ã€é¦¨è°¢î‹ƒè™»å¥¶ç¦ºæ„‹è€˜cä¿å®ˆæ€§ã€‚
å…¶ä¸å¼•ç‰©èˆ‡æ¨¡æ¿çš„æ£ç¢ºçµåˆæ˜¯é—œéµã€‚引物與模æ¿çš„çµåˆåŠå¼•ç‰©éˆçš„延伸是éµå¾ªå ¿åŸºé…å°åŽŸå‰‡çš„。èšåˆé…¶åˆæˆåæ‡‰çš„å¿ å¯¦æ€§åŠTaq DNAèšåˆé…¶è€é«˜æº«æ€§ï¼Œä½¿å應ä¸æ¨¡æ¿èˆ‡å¼•ç‰©çš„çµåˆ(復性)å¯ä»¥åœ¨è¼ƒé«˜çš„溫度下進行,çµåˆçš„ç‰¹ç•°æ€§å¤§å¤§å¢žåŠ ï¼Œè¢«æ“´å¢žçš„é¶åŸºå› 片段也就能ä¿æŒå¾ˆé«˜çš„æ£ç¢ºåº¦ã€‚å†é€šéŽé¸æ“‡ç‰¹ç•°æ€§å’Œä¿å®ˆæ€§é«˜çš„é¶åŸºå› å€(qÅ«),其特異性程度就更高。
(2) éˆæ•åº¦é«˜
PCR產物的生æˆé‡æ˜¯ä»¥æŒ‡æ•¸(shù)æ–¹å¼å¢žåŠ 的,能將皮克(pg=10-12g)é‡ç´šçš„起始待測模æ¿æ“´å¢žåˆ°å¾®å…‹(ug=10-6g)水平。能從100è¬å€‹ç´°èƒžä¸æª¢å‡ºä¸€å€‹é¶ç´°èƒžï¼›åœ¨ç—…毒的檢測ä¸ï¼ŒPCRçš„éˆæ•åº¦å¯é”3個RFU(空斑形æˆå–®ä½);在細èŒå¸ä¸zuiå°æª¢å‡ºçŽ‡ç‚º3個細èŒã€‚
(3) 簡便ã€å¿«é€Ÿ
PCRå應用è€é«˜æº«çš„Taq DNAèšåˆé…¶ï¼Œä¸€æ¬¡æ€§åœ°å°‡åæ‡‰æ¶²åŠ å¥½åŽï¼Œå³åœ¨DNA擴增液和水浴é‹ä¸Šé€²è¡Œè®Šæ€§-退ç«-延伸å應,一般在2~4 å°æ™‚完æˆæ“´å¢žå應。擴增產物一般用電泳分æžï¼Œä¸ä¸€å®šè¦ç”¨åŒä½ç´ ,無放射性污染ã€æ˜“推廣。
(4) å°æ¨™æœ¬çš„純度è¦æ±‚低
ä¸éœ€è¦åˆ†é›¢ç—…毒或細èŒåŠåŸ¹é¤Š(yÇŽng)細胞,DNA 粗制å“åŠç¸½RNAå‡å¯ä½œç‚ºæ“´å¢žæ¨¡æ¿ã€‚å¯ç›´æŽ¥ç”¨è‡¨åºŠæ¨™æœ¬å¦‚血液ã€é«”腔液ã€æ´—嗽液ã€æ¯›ç™¼(fÄ)ã€ç´°èƒžã€æ´»PCR技術概論。